IFA-PGA是宁夏乙征生物工程有限公司与华东理工大学共同开发的一款新型固定化酶,其可以高效地催化青霉素G或头孢G酸水解生产6-APA或7-ADCA,也可以用于催化合成其他半合成青霉素和头孢菌素。此外,IFA-PGA也能用于催化制备手性氨基酸、氨基醇、肽等众多手性医药化工产品。
IFA-PGA基因来源于粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis),在大肠杆菌中高效异源表达,经发酵生产、分离纯化后,以共价结合的方法固定化在多孔颗粒状高分子树脂上,该固定化酶蛋白结合牢靠,稳定性极高。
IFA-PGA的特性
粪产碱杆菌来源的青霉素G酰化酶(PGA)分子由两个亚基组成的,与来自于大肠杆菌的PGA相比较,仅有53%的DNA序列同源和49%的蛋白序列同源,其两个亚基之间可以形成二硫键。IFA-PGA的酶学性质有独特的优点:(1)IFA-PGA 对底物具有更高亲和力,对青霉素G的Km值比大肠杆菌PGA低,比巨大芽孢杆菌PGA低三个数量级,其Kcat值是所有PGA中最高的;(2)IFA-PGA是PGA家族中唯一具有链内二硫键的成员,酶的热稳定性和pH稳定性均很高;(3)在手性分子识别上,IFA-PGA比大肠杆菌PGA、巨大芽孢杆菌PGA具有更高的选择性;(4)IFA-PGA在有机溶剂中表现出很高的稳定性。
IFA-PGA的最适温度在60-65℃,最适pH在8.0,水解青霉素的最适底物浓度在8-10%,水解头孢G酸的最适底物浓度在10-12%。
IFA-PGA产品性质
产品品牌 | IFA-PGA |
外观 | 灰白色的颗粒(不同批次之间颜色略有不同,但不影响酶活) |
载体 | 具有环氧基团的微孔球状树脂 |
颗粒大小 | 100-300μm |
固定化方法 | 共价结合法 |
水份 | 大约为湿重的45-55% |
活性(测定条件:2%Pen.GK, 28°C, pH8.0, 0.02M的磷酸缓冲液) | 具体数据待定U/g (湿重) |
IFA-PGA对青霉酸G钾盐、头孢G酸、6-APA、7-ADCA、苯乙酸的表面吸附 | 未检测到 |
稳定性 | 在4°C密闭储存保质期12个月以上 |
IFA-PGA的活力测定
在100 ml玻璃夹套反应器中,加入 50 ml 2 %Pen.GK溶液 (用0.02M的磷酸缓冲液配置),将pH计探头插入液面以下以检测反应液pH,采用机械搅拌,搅拌转速为200转/分,反应过程中用循环水浴控制反应温度在30℃,预热5 min后加入固定化酶mg,反应开始后pH下降,用碱式滴定管滴加0.1 M的NaOH标准溶液保持反应体系pH 稳定在8.0,反应开始后3 min开始计时,用秒表准确计时5 min后停止滴加NaOH标准溶液,记录5min内消耗的碱液体积以计算每克固定化IFA-PGA的酶活,计算公式如下:
公式中A为固定化酶酶活(U/g),VNaOH为NaOH标准溶液消耗的体积(ml),m为固定化酶的质量(g)。
包装与储存
本品采用聚乙烯塑料桶包装,规格有30公斤/桶、50公斤/桶,也可以根据客户的需要定制包装规格。
要求储藏在4 ℃密闭空间内,避免阳光直射和水分散失。
宁夏乙征生物工程有限公司 厂址:宁夏中卫市工业园区
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